Дс ифа вич анализ задержан. Анализ крови ифа на вич-инфекции. Расшифровка результатов ИФА на инфекцию ВИЧ-инфекцию

ИФА (иммуноферментный анализ, ELISA – англ.) вошел в жизнь практической медицины еще где-то в 60-х прошлого столетия. Первоначальной его задачей были гистологические исследования в научных целях, которые сводились к поиску и идентификации антигенной структуры клеток живого организма.

В основе метода ИФА лежит взаимодействие специфических (АТ) и родственных антигенов (АГ) с образованием комплекса «антиген – антитело» , который выявляют при помощи фермента. Этот факт натолкнул ученых на мысль, что метод может быть использован в диагностических целях для выявления специфических иммуноглобулинов различных классов, участвующих в иммунном ответе на ту или иную инфекцию. И это был прорыв в клинической лабораторной диагностике!

Активно использоваться метод начал только в начале 80-х и то, в основном, в специализированных учреждениях. Первыми иммуноферментными анализаторами были снабжены центры и станции переливания крови, инфекционные и венерологические стационары, поскольку рожденный на африканском континенте, появившийся на горизонте у нас и тут же примкнувший к «старым» инфекциям грозный СПИД, требовал незамедлительных мер диагностики и поиска лечебных препаратов, воздействующих на него.

Область применения метода ИФА

Возможности иммуноферментного анализа поистине обширны. Теперь и представить себе трудно, как можно обойтись без подобных исследований, применяемых буквально во всех отраслях медицины. Кажется, что может сделать ИФА в онкологии? Оказывается, может. И многое. Способность анализа находить маркеры, свойственные некоторым видам злокачественных новообразований, лежит в основе раннего выявления опухоли, когда другим способом она еще не определяется из-за своих небольших размеров.

Современная клиническая лабораторная диагностика (КДЛ), кроме онкомаркеров, располагает значительным арсеналом панелей для ИФА и использует их для диагностики различных патологических состояний (инфекционных процессов, гормональных нарушений) и мониторинга фармацевтических лечебных препаратов с целью выявления их влияния на организм больного и, кстати, не только человека. В настоящее время иммуноферментный анализ широко используется и в ветеринарной службе, ведь «братья наши меньшие» тоже подвержены многим заболеваниям, от которых, порой, очень сильно страдают.

Таким образом, ИФА, благодаря своей чувствительности и специфичности, по образцу крови, взятому из вены, может определить:

Гормональный статус (гормоны щитовидной железы и надпочечников, половые гормоны);
Присутствие вирусной и бактериальной инфекции (ВИЧ, В и С, хламидиоз, сифилис, и , и , а также многие другие болезни, вызванные патогенными микроорганизмами);
Следы жизнедеятельности микроорганизмов, возбудивших инфекционный процесс, который благополучно закончился и перешел в стадию формирования иммунного ответа на этот возбудитель. Такие следы, то есть, антитела, во многих случаях остаются циркулировать в крови пожизненно, чем защищают человека от повторного заражения.

В чем суть ИФА?

Иммуноферментный метод, позволяет определить не только присутствие самого возбудителя (качественный анализ), но и его количественное содержание в сыворотке крови больного.

Вирусовая или бактериальная доза существенно влияет на течение инфекционного процесса и его исход, поэтому количественному анализу отведена не последняя роль в диагностике и лечении заболеваний в различных формах и стадиях.

Однако зная иммуноферментные исследования, как метод ИФА, мы даже не задумываемся, как же ему удается охватить такой широкий круг микроорганизмов, населяющих нашу планету, многие из которых несут прямую угрозу здоровью и жизни человека и животных. А дело в том, что ИФА имеет много вариантов (неконкурентный и конкурентный – прямой и непрямой), каждый из которых решает свою задачу и, таким образом, позволяет проводить целенаправленный поиск.

Для выявления иммуноглобулинов того или иного класса используется традиционная 96-луночная полистироловая панель (планшет), в лунках которой в твердой фазе сосредоточены сорбированные рекомбинантные белки. Попавшие в лунку с сывороткой крови антитела или антигены, находят «знакомый» объект и образуют с ним комплекс (АГ – АТ), который, закрепившись ферментным конъюгатом, при считывании результатов проявится изменением окраски лунки.

Иммуноферментный анализ проводится на тест-системах определенной специфичности, изготовленных в специальных лабораториях и укомплектованными всеми необходимыми реагирующими компонентами. Исследования можно проводить с помощью промывных аппаратов («вошеров») и считывающих спектрофотометров, где большей частью задействован ручной труд. На полных автоматах, освобождающих лаборанта от монотонного закапывания, промывания и прочих рутинных дел, конечно, работать быстрее и удобнее, но не все лаборатории могут позволить себе такую роскошь и продолжают работать по старинке – на полуавтоматах.

Интерпретация результатов ИФА находится в компетенции врача лабораторной диагностики, при этом обязательно берется в расчет и присущее практически всем иммунохимическим реакциям свойство давать ложноположительные или ложноотрицательные ответы.

Видео: современное проведение иммуноферментного анализа

Результаты ИФА на примере сифилиса

Иммуноферментный анализ подходит для выявления всех форм , а, кроме этого, применяется в проведении скрининговых исследований. Для проведения анализа используют венозную кровь пациента, взятую натощак. В работе используются планшеты с определенной специфичностью (АТ классов А, М, G) или суммарные антитела.

Учитывая то, что АТ при сифилисе продуцируются в конкретной последовательности, ИФА может легко ответить на вопрос, когда произошло заражение и в какой стадии находится процесс, а расшифровка полученных результатов может быть представлена в следующем виде:

IgM указывают на продолжительность инфекционного процесса (могут появляться при обострении хронических воспалительных заболеваний);
IgA констатируют, что заражение случилось более месяца назад;
IgG свидетельствуют о том, что инфекция находится в самом разгаре или о проведенном недавно лечении, что легко выясняется при сборе анамнеза.

При проведении анализа на сифилис, лунки с отрицательным ответом (и отрицательный контроль) останутся бесцветными, в то время как положительный результат (как и положительный контроль) даст ярко-желтое окрашивание за счет изменения цвета хромогена, добавленного в ходе исследования. Однако интенсивность окраски не всегда совпадает с контролем, то есть, она может быть немного бледнее или слегка желтоватой. Это сомнительные результаты, которые, как правило, подлежат повторному исследованию с обязательным учетом количественных показателей, полученных на спектрофотометре, но в целом, окраска находится в прямо пропорциональной зависимости от количества иммунных комплексов (связанные между собой АГ и АТ).

Самый волнительный из иммуноферментных анализов – ИФА на ВИЧ

Анализ на , пожалуй, больше других интересен широкому кругу населения, ведь пока нельзя с уверенностью утверждать, что исчезли многие социальные проблемы (проституция, наркомания и др.). К сожалению, ВИЧ затрагивает не только эти слои человеческого общества, заразиться можно при различных обстоятельствах, не связанных с половой распущенностью или приемом наркотиков. Но коль возникла необходимость обследования на ВИЧ, то бояться не следует, что все вокруг узнают о посещении такой лаборатории. Сейчас ВИЧ-инфицированные люди защищены законом, а сомневающиеся могут обратиться в анонимные кабинеты, где можно решить проблему, не боясь огласки и осуждения.

Иммуноферментный метод, применяемый для диагностики ВИЧ инфекции, относится к первостепенным стандартным исследованиям, которые, однако, требуют особых условий, поскольку тема очень деликатная.

ИФА на ВИЧ имеет смысл проводить после полового контакта, переливания крови, других медицинских манипуляций , предполагающих заражение, и по окончании инкубационного периода («серонегативное окно»), но следует учитывать, что этот промежуток времени не является постоянным. Он может закончиться через 14-30 дней, а может продолжаться до полугода, поэтому средним значением принято считать интервал от 45 до 90 дней. На ВИЧ кровь сдают так же, как и на другие инфекции – из вены на голодный желудок. Результаты будут готовы в зависимости от накопления материала в лаборатории и ее загруженности (от 2 до 10 дней), хотя чаще всего лаборатории обеспечивают получение ответа в тот же день или на следующий.

Что можно ожидать от результатов на ВИЧ?

ИФА на ВИЧ-инфекцию определяет антитела к двум разновидностям вируса: ВИЧ-1 (более распространенный в России и других странах Европы и Азии) и ВИЧ-2 (встречающийся чаще на территории Западной Африки).

Задачей ИФА ВИЧ является поиск АТ класса G, которые выявляются на всех тест-системах, но в более позднем периоде, и АТ классов А и М, выявляемых на рекомбинантных тест-наборах нового поколения, позволяющих найти антитела на самых ранних стадиях (инкубационный период – «серонегативное окно»). От ИФА можно ожидать следующие варианты ответов:

Первичный положительный результат: кровь подлежит перепроверке на тест-системе такого же типа, но по возможности другой серии и другим человеком (лаборантом);
Повторный (+) предполагает новый забор крови у пациента с исследованием ее подобно первичному анализу;
Очередной положительный результат подлежит референтному анализу, при котором используются высокоспецифичные тест-наборы (2-3 шт.);
Положительный результат в обеих (или в трех) системах направляется на иммуноблотинг (тот же ИФА, но выполненный в индивидуальном порядке на тест наборах особо высокой специфичности).

Заключение о ВИЧ инфицировании выносится только на основании иммуноблотинга. Проводится беседа с инфицированным в условиях полной конфиденциальности. Разглашение медицинской тайны в России, как, впрочем, и в других странах, подлежит уголовному наказанию.

Анализы на хламидии и цитомегаловирус иммуноферментным методом также обрели особую популярность, ввиду того, что позволяют определить время заражения, стадию заболевания и эффективность лечебных мероприятий.

При внедрении тоже можно наблюдать появление антител различных классов в разных фазах патологического состояния, вызванного инфекционным агентом:

IgM могут обнаружиться уже дней через семь после заражения;
IgA говорят о том, что инфекция в организме живет уже более месяца;
IgG подтверждают диагноз хламидиоза, помогает следить за лечением и определить его действенность. Следует заметить, что антитела класса G остаются и циркулируют в организме независимо от давности болезни, поэтому для правильной расшифровки анализа нужно принимать во внимание референтные значения (нормы), которые, кстати, для каждой КДЛ свои: с учетом марки тест-системы и специфичности реагентов, входящих в набор. Значения нормы вписываются в бланк рядом с результатом ИФА.

Что касается , то здесь несколько иначе: антитела класса М появляются приблизительно через месяц-полтора, то есть, положительным результат (IgM+) становится в фазе первичного инфицирования или при реактивации скрытой инфекции и остается таковым от 4 месяцев до полугода.

Наличие АТ класса G характерно для начала первичной острой инфекции или реинфекции. Анализ констатирует, что вирус имеет место, однако информации, в какой стадии находится инфекционный процесс – не дает. Между тем, определение нормы титра IgG тоже вызывает затруднения, так как она целиком зависит от иммунного статуса конкретного человека, который, впрочем, устанавливается выявлением иммуноглобулинов класса G. Учитывая такое поведение антител, при диагностике ЦМВИ возникает необходимость в оценке способностей антител класса G взаимодействовать с ЦМВ, чтобы потом «обезвредить» его (авидность АТ). На начальном этапе болезни IgG очень плохо связываются с антигенами вируса (низкая авидность) и лишь потом начинают проявлять активность, стало быть, можно говорить о повышении авидности антител.

О достоинствах иммуноферментного анализа можно говорить долго и много, ведь этот метод сумел решить многие диагностические задачи, используя лишь венозную кровь. Не нужно долгих ожиданий, волнений и проблем с забором материала для исследования. К тому же тест-системы для ИФА продолжают совершенствоваться и не за горами тот день, когда тест выдаст 100% достоверность результата.

Видео: учебный фильм МГМУ им. Сеченова об основах ИФА

ВИЧ – бич нашего поколения. Какие существуют методы для диагностики ВИЧ, углубленная информация о ИФА-тесте на ВИЧ. Как сдавать, как трактовать результаты анализа.

Вирус иммунодефицита человека – одна из самых страшных инфекций для нашего поколения.

ВИЧ деструктивно влияет на нашу иммунную систему, и если вовремя не остановить прогресс заболевания, он может трансформироваться в синдром приобретенного иммунодефицита . ВИЧ распространяется через непосредственный контакт партнеров при сексуальном акте через мужские и женские половые органы. Еще одной причиной заражения может стать попадание вируса через кровь. Это происходит вследствие использования нестерильных инструментов, переливанием зараженной крови и даже через поколения: ребенку от инфицированной матери при кормление грудью.

До сих пор ученые по всему миру ломают голову над созданием лекарства нового поколения, способного излечить от СПИДа, однако, несмотря на большие темпы научного прогресса, вирус иммунодефицита человека продолжает распространяться по планете.

ИФА – метод диагностики ВИЧ

Учеными поколения 20-го века разработано несколько методов диагностики ВИЧ, важнейшим из которых считают иммуноферментный анализ. ИФА на ВИЧ стали проводить относительно недавно – в начале девяностых годов. С течением времени метод оттачивался, приобретал новые детали. Теперь достоверность метода ИФА одна из самых высоких – около 98%. Соответственно, такой метод проводится все чаще.

ИФА – первый анализ, с которым сталкивается пациент при обследовании на ВИЧ. Метод ИФА определяет наличие в крови антител. Если тест находит присутствие антител в крови, значит, и вирус присутствует. Однако, информацию по этому тесту необходимо подкреплять и другими анализами, такими как иммунный блоттинг (ИБ) и метод последнего поколения – полимеразная цепная реакция (ПЦР).

Антитела – специальные белковые соединения, которые продуцируют плазматические клетки после как реакцию на попадание в организм инфекции (антитела начинают образовываться через 1-2 месяца с момента заражения).

Причины возникновения ВИЧ

Врач выпишет вам направление на анализ, если вы контактировали с человеком, зараженным ВИЧ либо существует опасность инфицирования. К группе опасности заражения ВИЧ относят поколения людей:

проходящих в течение месяца курс инъекционного лечения;
имеющих сексуальные отношения без специальных средств предохранения;
переносчиков инфекций, передающихся во время сексуального контакта;
пациентам после прохождения процедуры переливания крови либо укола обнаружения причины свертывания крови в восьмидесятые годы.

Если у вас есть сомнения относительно вашего ВИЧ-статуса и опасения, связанные с возможностью заражения, рекомендуется незамедлительно обратиться за помощью в любое медицинское учреждение нашей страны для проведения комплексного обследования на ВИЧ. Результат на анализы получают в течение месяца. Людям в группе риска по ВИЧ рекомендуется проходить обследование через каждые 4 месяца.

Как сдать анализ

Какой-то особенной подготовки к сдаче анализа крови на ВИЧ не требуется, однако лучше придерживаться простейших правил:

лучше не кушать с вечера, а сдавать анализ натощак утром;
не советуют загружать организм физической работой;
употреблять здоровую пищу, воздержаться на некоторое время от сигарет и алкоголя;
для исключения ложных показателей теста не стоит сдавать анализ после лечения серьезных заболеваний.

Владельцы патента RU 2515051:

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Иммуноферментная тест-система для определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека. Тест-система включает иммуносорбент на основе антигенов вируса иммунодефицита человека 1 типа (env ВИЧ-1 и ВИЧ-1 группы О), раствор для разведения образцов (РРС) и детектирующие реагенты (конъюгаты, хромоген/субстрат). Изобретение относится также к способу определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека путем исследования сыворотки крови больного при помощи описанной иммуноферментной тест-системы. Изобретение позволяет быстро и просто определять вероятные сроки заражения ВИЧ-инфекцией. 2 н.п. ф-лы, 4 табл., 2 пр.

ИЗОБРЕТЕНИЕ относится к области биотехнологии и медицины. И может быть использовано для определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека.

Распространение ВИЧ-инфекции остается реальной проблемой современного мира. Поскольку своевременная и качественная диагностика является реальным средством для сокращения ареала распространения ВИЧ-инфекции, то разработка эффективной тест-системы, способной определить вероятный срок инфицирования, является важной задачей современного общества.

Анализ уровня техники показал существование ряда способов и тестов, предложенных разными авторами, для определения стадий ВИЧ-инфекции с использованием различных методов. Известен, например, молекулярно-генетический тест, основанный на определении вирусной нагрузки периферической крови методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) (Кравченко А.В., Серебровская Л.В., Голохвостова Е.Л. и др. Тимазид в сочетании с хивидом и инвиразой в комплесной терапии больных с ВИЧ-инфекцией. - Эпидемиология и инфекционные болезни. - 1998. - №5 - с.51-52). Известен способ оценки стадий ВИЧ-инфекции (Клиническая иммунология и аллергология под ред. Г.Лолора-младшего. - М.: Практика, 2000. - С.585-587), заключающийся в определении уровня сывороточного β 2 -микроглобулина. Описан способ диагностики стадий ВИЧ-инфекции (В.В.Покровский с соавт. "Клиническая диагностика и лечение ВИЧ-инфекции". - М.: ГОУ ВУНМЦ РФ, 2001. - С.11), заключающийся в определении абсолютного количества CD4+лимфоцитов периферической крови. Также известен способ диагностики стадий ВИЧ-инфекции, основанный на том, что при исследовании сыворотки крови пациента методом иммуноферментного анализа (ИФА) определяют оптическую плотность (ОП) исходного образца сыворотки крови, отражающую уровень ВИЧ-специфических антител, и ОП исходного образца сыворотки, инкубированного в течение 10 минут со 100 мкл 3.5 М раствора изотиоционата натрия. При снижении ОП на 40% и менее диагностируют стадию А - генерализованной лимфаденопатии, при снижении ОП в интервале 40-60% - стадию В - бациллярного ангиоматоза, орофарингеального кандидоза и т.д., а при снижении ОП на 60% и более - стадию С - СПИД (RU 2251701).

Таким образом, проведенный анализ уровня техники показал, что ни один из существующих источников не может служить ближайшим аналогом к заявляемому изобретению, так как все указанные документы относятся к способам и тестам, определяющим стадию ВИЧ-инфекции, и ни один из описанных источников не содержит технических решений, направленных на определение вероятного временного интервала заражения. Заявляемое изобретение относится к тест-системе, определяющей вероятный срок заражения ВИЧ-инфекцией. Анализ уровня техники не выявил аналогичных решений, направленных на решение поставленной задачи.

В настоящем изобретении заявляется набор реагентов «ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК» для определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека. Тест предназначен для дополнительного исследования ВИЧ-позитивных образцов с подтвержденным положительным результатом в иммунном блоте. Возможно исследование образцов с неопределенным или негативным результатом исследования в иммунном блоте, в которых подтверждено наличие ВИЧ РНК и/или антигена р24 ВИЧ-1.

В настоящем изобретении заявляется также способ использования данным набором реагентов «ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК» для определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека.

Техническим результатом заявленного изобретения является определение вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, простота выполнения теста, что позволяет использовать заявленное изобретение для эпидемиологического надзора за динамикой распространения ВИЧ-инфекции, за динамикой выявления сероконверторов в определенной популяции (поло-возрастные, социальные группы населения), а также при эпидемиологическом расследовании случаев и очагов ВИЧ-инфекции.

Сущность предлагаемого технического решения состоит в том, что определение вероятного срока заражения ВИЧ-1 проводят с помощью тест-системы, которая включает иммуносорбент на основе антигенов вируса иммунодефицита человека 1 типа (env ВИЧ-1 и ВИЧ-1 группы О), раствор для разведения образцов (РРС) и детектирующие реагенты (конъюгаты, хромоген/субстрат). Исследуемые образцы тестируются нативными и разведенными в растворе для разведения образцов. По результатам тестирования образцы подразделяются на «ранние» и «поздние». «Ранние» образцы - вероятный срок инфицирования до 9 месяцев от момента заражения, «поздние» образцы - вероятный срок инфицирования 9 и более месяцев от момента заражения. Принадлежность образца к «ранним» или «поздним» оценивается по проценту падения оптической плотности (ОП) разведенного образца по отношению к неразведенному.

Данные примеры служат для иллюстрации конкретных воплощений изобретения и не направлены на сужение прав заявителя. Под объем прав заявителя подпадают все возможные варианты изобретения, в том числе и не приведенные в данном разделе.

В качестве иммуносорбента используются рекомбинантные антигены, содержащие иммунодоминантные регионы env ВИЧ-1 и ВИЧ-1 группы О. Конъюгат-1 - это смесь рекомбинантных антигенов gp41 ВИЧ-1 и gp41 ВИЧ-1 группы О, конъюгированных с биотином. На первом этапе исследуемые образцы, контрольные образцы и их разведения 1:101, а также РРС инкубируют с конъюгатом-1. Специфические антитела, присутствующие в исследуемых и контрольных положительных образцах, связываются с антигенами, сорбированными в лунках микропланшета, и антигенами, конъюгированными с биотином, и образуют устойчивые комплексы. Избыток образцов и конъюгата-1 удаляется при промывке. На следующем этапе в лунки добавляется стрептавидин, конъюгированный с пероксидазой хрена (конъюгат-2). Конъюгат-2 связывается с комплексом антиген-антитело-антиген, присутствующим в лунке. Избыток конъюгата-2 удаляется промывкой, и затем в лунки добавляется хромоген/субстрат. В лунках со связавшимся конъюгатом-2 развивается голубое окрашивание, которое сменяется на желтое при добавлении стоп-раствора. Учет результатов проводится при помощи спектрофотометра.

В качестве иммуносорбента используются рекомбинантные антигены, содержащие иммунодоминантные регионы env ВИЧ-1 и ВИЧ-1 группы О. Используется один конъюгат - смесь рекомбинантных антигенов gp41 ВИЧ-1 и gp41 ВИЧ-1 группы О, конъюгированных с пероксидазой хрена. В процессе анализа образцы, контроли и их разведения, а также РРС инкубируют с конъюгатом в покрытых антигенами лунках планшета. Образующийся устойчивый комплекс после удаления избытка образца и конъюгата проявляется добавлением хромогена/субстрата. При этом развивается голубое окрашивание, которое сменяется на желтое при добавлении стоп-раствора. Учет результатов проводится при помощи спектрофотометра.

Принадлежность исследуемых образцов к «ранним» или «поздним» оценивается по % падения ОП при разведении образца, который рассчитывается по формуле:

% п а д е н и е О П = 100 % − О П р а з в е д. о б р а з ц а − О П с р. Р Р С О П ц е л ь н о г о о б р а з ц а × 100 % ,

где ОПср. РРС - среднее значение ОП РРС (рассчитывается по нескольким значениям ОП РРС).

Исследуемые образцы расценивать как «ранние»: если падение ОП>40%.

Исследуемые образцы расценивать как «поздние»: если падение ОП≤40%.

Пример расчета % падения ОП при разведении образца приведен в таблице 1.

Для учета и обработки результатов удобно использовать программу Excel. Использование данного приложения позволит проводить расчеты автоматически. Программа для обработки результатов тестирования находится на диске, приложенном к набору, или ее можно найти на сайте компании.

При разработке и оценке теста использовались образцы сероконверсионных панелей (BBI, Inc., Zeptometrix, США) и ВИЧ-позитивные образцы сывороток (плазмы) крови с установленными вероятными сроками заражения. Вероятность правильного определения давности заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, установленная по сероконверсионным панелям, составляет 100% (данные представлены в таблице 2), по образцам сывороток лиц с условно установленным сроком заражения (n=129) составляет 94% (таблицы 3, 4; данные приведены частично).

Таблица 2
Результаты тестирования ВИЧ-позитивных образцов сыворотки/плазмы крови, установленные по сероконверсионным панелям
Сероконверсионная панель	Дни с первого забора крови	Результат тестирования в «ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК»
BBI PRB 914	31	«ранние»
BBI PRB 916	35	«ранние»
BBI PRB 925	49	«ранние»
BBI PRB 929	28	«ранние»
BBI PRB 930	10	«ранние»
BBI PRB 931	42	«ранние»
BBI PRB 934	11	«ранние»
BBI PRB 941	25	«ранние»
BBI PRB 942	14	«ранние»
BBI PRB 944	16	«ранние»
BBI PRB 947	20	«ранние»
BBI PRB 951	19	«ранние»
BBI PRB 952	21	«ранние»
BBI PRB 955	14	«ранние»
BBI PRB 965	21	«ранние»
BBI PRB 966	51	«ранние»
BBI PRB 968	35	«ранние»
BBI PRB 969	77	«ранние»
ZMC HIV 6243	33	«ранние»
ZMC HIV 6247	30	«ранние»
ZMC HIV 9014	31	«ранние»
ZMC HIV 9017	35	«ранние»
ZMC HIV 9018	33	«ранние»
ZMC HIV 9021	57	«ранние»
ZMC HIV 9022	29	«ранние»
ZMC HIV 9032	55	«ранние»
ZMC HIV 9077	104	«ранние»
ZMC HIV 9079	95	«ранние»
ZMC HIV 12008	42	«ранние»

В тесте «ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК» оценивалась возможность исследования образцов сывороток (плазмы) крови, содержащих антитела к ВИЧ-1 различных субтипов, в том числе к ВИЧ-1 группы О: референс панель QCS 42-28-327-03Р (ГИСК) (субтипы А, В, С) (за исключением образца №24, содержащего антитела к ВИЧ-2), 1-ая международная референс панель анти ВИЧ (NIBSC Code:02/210) (субтипы А, В, С, Е) (за исключением образца №5, содержащего антитела к ВИЧ-2), образцы сывороток (плазмы) крови, содержащих антитела к ВИЧ-1 группы О (№1342, К00175, К00259; BioMex). Результаты свидетельствуют о возможности исследования образцов сывороток (плазмы) крови, содержащих антитела к ВИЧ-1, принадлежащих различным субтипам, в том числе к ВИЧ-1 группы О, в тесте «ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК».

Специфичность набора реагентов «ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК» определяли при исследовании образцов сывороток донорской крови (n=352), продемонстрировавших в ИФА отрицательный результат. Специфичность составила 100%. Дополнительно были протестированы 255 образцов сывороток крови (отрицательных в ИФА):

■ 167 образцов сывороток крови от беременных женщин и больных с инфекционными заболеваниями;

■ 128 образцов сывороток крови от пациентов с различными неинфекционными заболеваниями.

Специфичность составила - 100%.

Полученные данные показывают высокую эффективность разработанной тест-системы «ДС-ИФА-ВИЧ-АТ-СРОК» при определении вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека.

1. Иммуноферментная тест-система для определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека, характеризующаяся тем, что она включает иммуносорбент на основе антигенов вируса иммунодефицита человека 1 типа (env ВИЧ-1 и ВИЧ-1 группы О), раствор для разведения образцов (РРС) и детектирующие реагенты, представляющие собой конъюгаты, хромоген/субстрат.

2. Способ определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа (ВИЧ-1), в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке (плазме) крови человека, основанный на разном содержании антител в зависимости от срока инфицирования, включающий разделение исследуемого образца на две части и разведение одной из них; исследование обеих (нативной и разведенной) частей образца сыворотки крови больного при помощи иммуноферментной тест-системы, описанной в п.1; определение оптической плотности (ОП) нативного и разведенного образцов и РРС; расчет среднего значения ОП РРС; вычисление процента падения ОП разведенного образца по отношению к неразведенному по формуле
% п а д е н и е О П = 100 % − О П р а з в е д. о б р а з ц а − О П с р. Р Р С О П ц е л ь н о г о о б р а з ц а × 100 % ,
при этом вероятный срок заражения расценивается как «ранний», если падение ОП>40%, и как «поздний» - если падение ОП≤40%.

Похожие патенты:

Изобретение относится к компьютерному способу, использующему биохимические базы данных при разработке новых белковых соединений. Проектирование осуществляется оператором с помощью специально написанной программы PROTCOM на основе использования базы данных пентафрагментов белков.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается способа выявления O-гликозилированных белков в составе клеточных гомогенатов, подготавливаемых к протеомному и фосфопротеомному анализу.

Изобретение относится к области биотехнологии и иммунологии. Предложено моноклональное антитело и его антиген-связывающие части, которые специфически связывают C-концевую или центральную область фактора ингибирования миграции макрофагов (MIF).

Изобретение относится к области молекулярной биологии и медицинской диагностики. Предложен способ детекции белков в амилоидном состоянии, в котором получают образец лизата культуры дрожжей или ткани млекопитающего, добавляют к образцу ионный детергент, концентрируют белки в амилоидной форме на ацетатцеллюлозной мембране и детектируют их с использованием аптамеров, их конъюгатов или антител, специфичных к амилоидной форме белков.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к иммуноферментным анализам, и представляет собой способ получения инкорпорированных контрольных образцов для иммуноферментных тест-систем для определения инфекций группы TORCH.

Изобретение относится к медицине, а именно к гинекологии, и может быть использовано для индивидуального подбора препаратов, содержащих пробиотические штаммы лактобактерий, для эффективной интравагинальной терапии.

Группа изобретений относится к составу реагента датчика-анализатора, адаптированного для содействия определению концентрации анализируемого вещества в жидкой пробе, к способам определения концентрации анализируемого вещества в жидкой пробе и к способу нанесения состава реагента датчика анализатора на подложку способом трафаретной печати.

Группа изобретений относится к ветеринарии и касается адъювантных композиций, содержащих комбинацию Quil A или его очищенной фракции, холестерина, диметилдиоктадециламмоний бромида (DDA), полиакриловой кислоты (CARBOPOL) и CpG и/или N-(2-дезокси-2-L-лейциламино-β-D-глюкопиранозил)-N-октадецилдодеканамида ацетата; способа приготовления таких адъювантных композиций и применению таких адъювантных композиций в иммуногенных и вакцинных композициях с различными антигенами.

Настоящее изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Предложен способ создания антитела и его функциональных фрагментов, направленных против опухолевого антигена, экспрессируемого на поверхности опухоли, устойчивой по меньшей мере к одному противоопухолевому соединению, основанный на применении для иммунизации измельченного гомогената, и/или суспензии, и/или клеточного лизата, происходящих из такой опухоли. Также рассмотрено применение способа по изобретению для получения моноклональных антител и их функциональных фрагментов, моноклональные антитела, полученные этим способом, кодирующие их нуклеиновые кислоты, экспрессирующий вектор, клетка-хозяин и способ получения антитела с их использованием, а также гибридомы, способные секретировать эти антитела, применение антител и их функциональных фрагментов для изготовления лекарства, противоопухолевая композиция и ее применение в качестве лекарства. Данное изобретение может найти дальнейшее применение в терапии резистентных опухолей. 16 н. и 26 з.п. ф-лы, 7 ил., 4 пр., 6 табл.

Изобретение относится к области биотехнологии и медицины. Иммуноферментная тест-система для определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа, в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке крови человека. Тест-система включает иммуносорбент на основе антигенов вируса иммунодефицита человека 1 типа, раствор для разведения образцов и детектирующие реагенты. Изобретение относится также к способу определения вероятных сроков заражения вирусом иммунодефицита человека 1 типа, в том числе ВИЧ-1 группы О, в сыворотке крови человека путем исследования сыворотки крови больного при помощи описанной иммуноферментной тест-системы. Изобретение позволяет быстро и просто определять вероятные сроки заражения ВИЧ-инфекцией. 2 н.п. ф-лы, 4 табл., 2 пр.

С.Н. ИГОЛКИНА, В.Ф. ПУЗЫРЕВ, Л.Г. ЗИНИНА, Н.М. ДЕНИСОВА, А.Н. БУРКОВ,

А.П. ОБРЯДИНА, Т.И. УЛАНОВА
ООО «Научно-производственное объединение «Диагностические системы»,

Нижний Новгород
ИММУНОФЕРМЕНТНЫЕ ТЕСТ-СИСТЕМЫ «ДС-ИФА-HBeAg» и «ДС-ИФА-анти-HBe» ДЛЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ И ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ИСХОДОВ ОСТРОГО И ХРОНИЧЕСКОГО ГЕПАТИТА В
Гепатит В – вирусное инфекционное заболевание, характеризующееся тяжелым

воспалительным поражением печени . Около 1% летальных исходов наблюдается в

острый период болезни, в 4-10 % случаев происходит трансформация в хронический

процесс с возможным формированием в последующем цирроза печени и первичной

гепатокарциномы .

Несмотря на тенденцию к снижению заболеваемости острым гепатитом В, продолжает формироваться опасная в эпидемиологическом плане группа больных, которым впервые поставлен диагноз «хронический вирусный гепатит», а также группа носителей возбудителя заболевания. Сохраняется неблагополучный прогноз, связанный с высокой заболеваемостью гепатитом В среди населения репродуктивного возраста, а также среди подростков .

Поэтому, сейчас особенно актуальны вопросы лечения, профилактики и диагностики гепатита В. В настоящее время для детекции маркеров этой инфекции широко применяются методы иммуноферментного анализа. К числу важнейших серологических маркеров ВГВ относятся е-антиген (HBeAg) и антитела к е-антигену (анти-HBe). HBeAg ассоциируется с высокой инфицированностью крови, свидетельствуя об активной репликации вируса гепатита В (HBV). Установлено, что высокие титры HBeAg соответствуют высокой ДНК-полимеразной активности и всегда сочетаются с обнаружением полных частиц Дейна . При попадании сыворотки, содержащей HBeAg, в кровь здорового человека опасность заражения на много порядков выше, чем после наступления сероконверсии.

При остром гепатите В HBeAg обнаруживается в крови на ранних этапах инфекционного процесса уже при первых клинических проявлениях болезни, отставая на неделю от появления HBsAg. Острый гепатит В (ОГВ) циклического течения характеризуется кратковременной циркуляцией HBeAg. Вскоре, на 2-3 неделе желтушного периода появляются анти-HBe, что позволяет прогнозировать благоприятный исход заболевания .

Анти-HBe циркулируют в крови на протяжении 2-5 лет, реже несколько месяцев.

Наступление сероконверсии HBeAg-антиHBe знаменует резкое снижение активности

инфекционного процесса . Обнаружение HBeAg в крови пациентов после 2-х месяцев заболевания обозначает хронизацию патологического процесса . В этом случае анти-HBe могут образовываться спустя много лет после появления антител к HBcAg или вовсе не выявляться.

Появление анти-HBe может иметь неблагоприятное прогностическое значение в

остром периоде ВГВ при тяжелых формах, что соответствует мутации в pre-core зоне с

образованием HBV «e-» штамма .

Целью данной работы была разработка высокочувствительных и специфичных

иммуноферментных тест-систем для выявления HBeAg и анти-HBe и оценка их основных характеристик.

Материалы и методы.

1. Иммуноферментная тест-система «ДС-ИФА-HВeAg». Действующим началом теста

являются поликлональные антитела козы к рекомбинантному HBeAg, производства НПО «Диагностические системы», Нижний Новгород, сорбированные на твердую фазу, и конъюгат, представляющий собой поликлональные антитела козы к рекомбинантному HBeAg, меченные пероксидазой хрена, производства НПО «Диагностические системы», Нижний Новгород. Схема проведения анализа представляет собой одностадийный «сэндвич».Общая продолжительность реакции 1,5 часа. Образец сыворотки анализируется неразведенным.

2. Иммуноферментная тест-система «ДС-ИФА-анти-HBe». Основу теста составляют

рекомбинантный HBeAg (AHBV 102), производства НПО «Диагностические системы»,

Нижний Новгород, сорбированный на твердой фазе и конъюгат анти-IgG с пероксидазой хрена, производства «Сорбент Сервис», Москва. Реакция проходит в две стадии. К иммобилизованному антигену добавляют исследуемую сыворотку в разведении 1/10 и, после инкубации и удаления не связавшихся компонентов, проводят выявление специфических иммунокомплексов с помощью мышиных моноклональных антител против IgG человека, меченных пероксидазой хрена.

3. Для оценки разработанных тест-систем было использовано 2178 образцов сывороток

крови. Из них 480 образцов сывороток здоровых доноров. 1680 образцов представляют

собой образцы сывороток крови, содержащие различные маркеры вируса гепатита В.

Восемнадцать образцов были получены в динамике от больных с клиническим диагнозом «острый вирусный гепатит В». Предварительно все образцы были проверены на наличие HBsAg, HBeAg, анти-HBe, анти-HBc с помощью тест-систем производства НПО «Диагностические системы», Нижний Новгород: «ИФА-НВsAg/m», «ДС-ИФА-НВеAg», «ДС-ИФА-анти-HBe», «ИФА-анти-НВс».

4. Сравнительную оценку разработанных тест-систем осуществляли с помощью

коммерческого препарата «Monolisa HBe», производства BIO-RAD, Франция;

Результаты и обсуждение. В НПО «Диагностические системы» разработаны 2 новых диагностикума: «ДС-ИФА-HBeAg» и «ДС-ИФА-анти-HBe». Тест-система «ДС-ИФА-HBeAg» предназначена для выявления е-антигена вируса гепатита В в сыворотке (плазме) крови людей методом иммуноферментного анализа и может быть использована для специфической диагностики, определения активности инфекционного процесса, прогнозирования тяжести и исхода гепатита В.

Тест-система «ДС-ИФА-анти-HBe» предназначена для выявления антител класса IgG к е-антигену вируса гепатита В в сыворотке (плазме) крови человека и может быть

использована при прогнозе течения инфекционного процесса и контроле проводимой терапии при гепатите В.

Для изучения специфичности новых тестов была проведена оценка распределения

оптической плотности (ОП) образцов сывороток крови, содержащих и не содержащих

НВeАg или анти-НВе. Были использованы образцы сывороток крови здоровых доноров и образцы сывороток крови, отобранные по различным маркерам вируса гепатита В на

станциях переливания крови. Результаты исследования показали достоверное разделение двух популяций. Значения ОП образцов сывороток, не содержащих НВеАg, колебались в пределах от 0,011 до 0,111, а основной пик образцов сывороток, содержащих НВеАg находился в пределах от 2,186 до 3,186 (рисунок 1а).

Рис.1a. Распределение ОП образцов сывороток, содержащих и не содержащих HBeAg в тест-системе «ДС-ИФА- HBeAg »
Пик, соответствующий группе сывороток с низкой ОП (0,3-0,6), вероятно, составляют образцы сывороток, отобранные на ранних этапах инфекционного процесса.

Уже в инкубационном периоде у больных закономерно регистрируются в крови НВsAg и НВеАg, что подтверждает их потенциальную эпидемиологическую опасность.

Диапазон оптической плотности образцов сывороток, не содержащих анти-НВе

находился в пределах от 0,002 до 0,122, а основной пик ОП образцов сывороток, содержащих анти-НВе, находился в пределах от 2,431 до 3,231(рисунок 1б).

Рис. 1б. Распределение ОП образцов сывороток, содержащих и не содержащих анти-Н Be , в тест-системе «ДС-ИФА-анти- HBeAg »
Были изучены особенности распределения ОП анти-НВе положительных образцов

сывороток, содержащих (n =78) и не содержащих HВsAg (n =56).

Рис. 2а. HBe -положительных образцов сывороток, содержащих HBsAg в тест-системе «ДС-ИФА-анти- HBe ».

Рис.2б. Особенности распределения ОП анти- HBe -положительных образцов сывороток, не содержащих HBsAg в тест-системе «ДС-ИФА-анти- HBe ».
Оптические плотности 87% анти-HBe-позитивных образцов сывороток, не содержащих HВsAg, находились в пределах от 0,41до 0,81 (рисунок 2б). При этом лишь у 14% анти-HBe-положительных образцов сывороток, содержащих HВsAg, ОП была в этом диапазоне (рисунок 2а). Известно, что в фазу поздней реконвалесценции при отрицательной реактивности на НВsAg постепенно происходит снижение титров антител к НBеAg (рисунок 2б). Поэтому, возможно, преимущественная концентрация анти-НВе-положительных образцов соответствовала ОП меньше 0,8.

Полученные данные свидетельствуют о достоверности разделения положительных и

отрицательных образцов сывороток крови независимо от стадии заболевания. Изучение чувствительности и специфичности тест-систем «ДС-ИФА-HBeAg» и «ДС-ИФА-антиHBe» проводили в сравнении с тестом «Monolisa HBe» («BIORAD»,Франция) (таблица 1).

Таблица 1
Сравнительная характеристика чувствительности и специфичности

тест-систем ДС-ИФА-HВeAg и ДС-ИФА-антиHB

Показатель	Определение HВeAg		Определение антиHBe
Показатель	НПО «ДС», ДС-ИФА-HВeAg	«BIO-RAD», «Monolisa HВe»	НПО «ДС», ДС-ИФА-антиHBe	«BIO-RAD»,
Количество исследованных образцов	67	67	32	32
Выявлено положительных образцов	47	47	16	16
Выявлено отрицательных образцов	20	20	16	16

Данные, приведенные в таблице 1, показывают, 100%-ное совпадение результатов.

Известно, что дополнительное прогностическое значение имеет сочетанная индикация НВеАg и анти-НВе, особенно их количественная оценка. Быстрое нарастание титра анти-НВе характеризует активный гуморальный иммунный ответ и практически исключает угрозу хронизации . Нами проанализировано изменение содержания НВеАg/анти-НВе в образцах сывороток крови пациентов с клиническим диагнозом «острый вирусный гепатит В» (таблица 2).

Таблица 2
Динамика сероконверсии НВеАg/анти-НВе у больных ОГВ

Обследуемый больной	День отбора крови*	НВеАg	анти-НВе ОПобр./ОПкр.		Анти-HBc	Анти- HBc IgM
	1	1,4+	2,1+	+	+	+
	12	0,5-	1,0+	+	+	+
	21	0,3-	1,3+	+	+	+
	1	1,2+	1,2+	+	+	+
	5	0,4-	1,0+	+	+	+
	13	0,2-	2,5+	+	+	+
	1	1,2+	0,6-	+	+	+
	21	0,2-	4,6+	+	+	+
	30	0,2-	9,7+	+	+	+
	1	2,1+	0,5-	+	+	+
	8	0,6-	1,1+	+	+	+
	28	0,3-	2,8+	+	+	+
	1	0,7-	2,2+	+	+	+
	8	0,3-	2,2+	+	+	+
	15	0,3-	2,8+	+	+	+
	38	0,2-	3,0+	+	+	+
6	1	1,1+	4,4+	+	+	+
	14	0,5-	3,8+	+	+	+

* от поступления в стационар
Все образцы сывороток были исследованы на наличие серологических маркеров

ОГВ: НВsAg, анти-НВс, анти-НВс IgM. Период наблюдения варьировал от 13 до 38 дней. У больных №1, №2 и №6 анти-НВе обнаружены уже на фоне снижения титра НВеАg. У пациентов №3 и №4 анти-НВе появились после исчезновения из сыворотки крови НВеАg на 21 и 8 день соответственно. Анализ детекции НВеАg в сыворотке крови пациента №5 при поступлении в стационар показал отрицательный результат. При этом была зарегистрирована конверсия на анти-НВе уже в первый день обследования.

У всех обследуемых прослежена тенденция к увеличению титра антител к НВеАg в

сыворотке крови, что позволяет прогнозировать благоприятную динамику клинических

проявлений ОГВ и скорое выздоровление.

Проведенное изучение новых тест-системы показало их высокую диагностическую надежность. Результаты сравнения ДС-ИФА-HBeAg» и «ДС-ИФА-антиHBe» показали 100% совпадение с тестом «Monolisa HBe».

При исследовании образцов сывороток больных гепатитом В в динамике, тесты

подтвердили высокую чувствительность и специфичность.

Короткое время инкубации исследуемых образцов и конъюгата (1 ч) позволяет в минимальные сроки определить правильную тактику проведения лечебных мероприятий. Созданные тест-системы удобны в постановке, экономичны (требуется 50 мкл сыворотки для определения HBeAg и 10 мкл сыворотки для определения анти-HBe). Высокие качественные характеристики тестов позволяют успешно использовать их при прогнозе течения инфекционного процесса и контроле проводимой терапии при гепатите В.
ЛИТЕРАТУРА

1.Майер К.П. Гепатит и последствия гепатита / К.П. Майер.– М., ГЕОТАР, Медицина,1999.- C.720

2.Онищенко Г.Г. Распространение вирусных гепатитов как угроза национальной безопасности / Г.Г. Онищенко, Л.А. Дементьева // Журнал микробиологии. –2003.-№ 4.- С.93-99.

3.Соринсон С.Н. Вирусные гепатиты / С.Н.Соринсон. - Санкт-Петербург, Теза, 1997.- 306 С.

4. Baumeister M. Hepatitis B Virus e Antigen Specific Epitopes and Limitations of Commercial Anti-HВe Immunoassays / M. Baumeister // Journal of Medical Virology.- 2000.-N 60.- Р.256-263.

5.Kane M. Global program for control of hepatitis B infection / M. Kane// Vaccine. – 1995.-N131(Suppl. 1).- Р.47-6. Shunichi Sat о . Hepatitis B Virus Strains with Mutations in the Core Promoter in Patients with Fulminant Hepatitis / Shunichi Sato, Kazuyuki Suzuki // Annals of Internal Medicine. – 1995.- N122.- Р.241-248.

7. Ou J.- Н . Molecular biology of hepatitis B virus e antigen./ J.-Н.Ou // Journal of Gastroenterology and Hepatology. – 1997.- № 12 (Suppl.1)- Р. 178- 187.

8.Tiollais P. The hepatitis B virus. / P.Tiollais, C.Pourcel, A.Dejean // Nature. – 1985. – P.317, 489-495
Опубликовано: Ж. «Клиническая лабораторная диагностика» - 2005.-№6-С.-34-37

Исследование образцов крови при помощи ИФА на ВИЧ-инфекцию - это один из самых ранних и достоверных методов диагностики. Иммуноферментный тест состоит в числе немногих исследований наряду с ПЦР, которые с большой степенью вероятности подтверждают либо опровергают такой страшный диагноз, как ВИЧ-инфекция или СПИД. С момента выявления первых случаев заражения вирусом иммунодефицита на территории советского пространства, а это 1983 год. Лекарство, которое полностью бы исцеляло эту инфекцию, а также вакцина к ней, не были изобретены, но этот процесс находится в стадии активной разработки. А пока что, только ранняя диагностика ВИЧ-инфекции позволяет держать патологический процесс под контролем.

Информационный экскурс о ВИЧ-инфекции

Вирус иммунодефицита у человека относится к ретровирусам, которые обусловливают медленное течение заболевания. Проникая в организм, вирус иммунодефицита воздействует в первую очередь на лимфоидную ткань. Здоровый иммунитет вырабатывает Т-лимфоциты для того, чтобы распознать вновь прибывшего вирусного агента. После чего дать информацию антителам, по каким признакам узнать вирус иммунодефицита и уничтожить его. Процесс «опознания» вируса иммунодефицита происходит при помощи белков-рецепторов CD4. Но именно на этом этапе наблюдается нечто странное, то, что вот уже много лет не позволяет победить чуму XX века.

Клетка иммунитета СD4 для распознавания чужеродного агента вступает в контакт с вирусом иммунодефицита. В этот момент вирус иммунодефицита прикрепляется к мембране лимфоцита, сливается с оболочкой рецептора и внедряет в клетку иммунитета капсулу со своей генетической информацией и специфическими вирусными белками. И клетка, отправленная на вычисление вируса иммунодефицита, с этих пор сама становится зараженной. Но происходит все, к сожалению, не с одной клеткой, а в очень крупных масштабах. Иммунная система человека в ответ уже на «бывшие свои», а ныне зараженные клетки, создает новые антитела. Но вирусы иммунодефицита, по описанной ранее схеме, снова и снова производят захват клеток-защитников.

Таким образом, иммунитет человека попадает в замкнутый круг. Помочь организму можно только, если проводить высокоактивную антиретровирусную инфекцию (ВААРТ). А также перейти на полностью здоровый образ жизни и питания, что освободит большие ресурсы иммунитета от лишней работы. Ученые всего мира объединили свои усилия и постоянно проводят исследования в поисках эффективного лекарства против ВИЧ-инфекции.

Не так давно был произведен эксперимент с белком ССR5, который обеспечивает врожденную невосприимчивость организма определенной части людей к заражению ВИЧ-инфекцией. Ученые подвергли кровяную субстанцию людей добровольцев генной терапии, чтобы внедрить ССR5 в клетки Т-хелперов. У всех подопечных это привело к масштабному снижению числа ретровирусных ДНК. А у одного пациента вирус иммунодефицита этот метод позволил ликвидировать полностью. На основании данного эксперимента можно пока еще только предположить в единичном случае об успешной победе над страшной чумой XX века.

Начиная с 2016 года, эта деятельность продвинулась значительно вперед. Получены ошеломляющие по эффективности результаты девяносто процентного уничтожения вируса иммунодефицита при помощи атакующих антител, выделяемых мышечной тканью в обход захваченному иммунитету. Для этого в мышечную ткань подопытных живых существ вживляли специальный ген, продуцирующий эти самые клетки-киллеры для уничтожения ВИЧ-инфекции. Но на людях этот метод пока еще не применялся, хотя планируется в ближайшие годы.

Тем более не имеет смысл падать духом. А лучше как можно раньше выявить вирус иммунодефицита, что можно сделать при помощи ИФА, если имел место риск заражения. И в случае подтверждения диагноза, поддерживать свой иммунитет посредством ВААРТ до тех пор, пока новое лекарство от ВИЧ-инфекции будет обнародовано.

Диагностика ВИЧ-инфекции

Метод ИФА на ВИЧ-инфекцию нацелен на обнаружение в образце крови человека антител к вирусу иммунодефицита. Попадая в организм, ретровирусы к группе которых относится ВИЧ-инфекция, не сразу начинают активный захват иммунных клеток СD4 (Т-лимфоцитов). Но дожидаться, пока агрессивные агенты начнут смертельную деятельность в организме не стоит. Не секрет, что при любом заболевании, и ВИЧ-инфекция не является исключением, чем раньше начата терапия, тем эффективнее исцеление.

Когда дело касается вируса иммунодефицита человека, случаи полного исцеления официально зафиксированы не были. Но это совсем не значит, что нужно опустить руки, и пустить заболевание на самотек. С ВИЧ-инфекцией люди живут до 75–80 лет при условии выявления на начальной стадии и постоянной поддерживающей терапии.

Метод иммуноферментной диагностики ВИЧ-инфекции имеет высокую достоверность около 97–99%. Но именно эта незначительная часть в 1–3% может давать ложноположительный либо ложноотрицательный результат диагностики ВИЧ-инфекции при помощи ИФА. Для этих целей, чтобы окончательно подтвердить или опровергнуть показания иммуноферментного анализа, применяется анализ, именуемый иммуноблот (ИБ).

Что представляют собой методы ИФА и ИБ на ВИЧ-инфекцию

Иммунноферментный метод на ВИЧ-инфекцию 4-го поколения направлен не только на поиск и идентификацию патогенных клеток, но и на установления их численности. Следовательно, один иммуноферментный тест объединяет в себе качественное и количественное исследование. Метод ИФА 4-го поколения на ВИЧ-инфекцию на сроке от шести недель с момента предположительного заражения покажет 100% высокую достоверность результатов.

В основании иммуноферментного исследования лежит взаимодействие специфических антител и родственных им антигенов. Благодаря специальному ферменту, и происходит образование совокупности «антиген-антитело». Чтобы осуществить эту реакцию по обнаружению иммуноглобулинов к ВИЧ-инфекции, в полистероловую панель с 96-ю лунками, в которых в твердой форме находятся рекомбинантные белки (сорбированные), помещают образец крови. Оказавшиеся в емкости с сывороткой крови антигены либо антитела распознают известный им объект и образуют с ним соединение «АТ-АГ». Для установления антител к вирусам иммунодефицита 1 и 2 типов применяется также тест ДС ИФФ на ВИЧ АГ-АТ.

Преимущества иммуноферментного метода на ВИЧ-инфекцию 4-го поколения:

Высокая достоверность, более 96%. Ложные результаты чаще являются причиной не самого анализа, а неправильной подготовки или недавно перенесенного респираторного заболевания.
Определение как наличия, так и численности иммуноглобулинов.
Возможность отслеживать результат при проведении терапии ВИЧ-инфекции.
Скорость получения результатов анализа на ВИЧ-инфекцию, которая составляет несколько часов, если проводится в диагностическом центре.
Анализ на ВИЧ-инфекцию четыре, иммуноферментная реактивность которого значительно выше предшественников, информативен в период серологического окна вируса иммуннодефицита.

Иммунный блотинг является скринингом и назначается для определения типа антигена. Скрининговое исследование ИБ используют как верифицирующий тест при ВИЧ-инфекции через 5–7 недель после проведения ИФА. Метод ИБ основан на применении электрофореза для разделения антигенов вирусов иммунодефицита. Процесс разделения антигенов дает возможность обнаруживать специфические иммуноглобулины к каждому конкретному антигену ВИЧ-инфекции.

Иммунноблотинг применяют, когда иммуноферментный тест ВИЧ-инфекции два раза подряд показывает ложноположительный или ложноотрицательный результат. Подозрения могут возникнуть при отсутствии или наоборот наличии характерных симптомов ВИЧ-инфекции. Хотя здесь тоже могут возникать различные вариации.

Расшифровка результатов ИФА на инфекцию ВИЧ-инфекцию

В случае, когда ИФА плюс подтверждается скринингом ИБ положительным, сомнений не возникает, у пациента в организме присутствует вирус иммунодефицита. Но если, к примеру, ИФФ на ВИЧ положительный, а иммуноблот отрицательный, то делают вывод об инфицировании «минус», то есть о его отсутствии.

Только в такой ситуации пациента все равно отправляют на дополнительное обследование, чтобы исключить наверняка вирус иммунодефицита.

А при иммуноферментном анализе на ВИЧ 4 поколения «минус», а иммуноблоттинге положительном, возможно в организме присутствует иная инфекция. Возможно у человека какое-либо аутоиммунное заболевание, онкологический процесс, бывает псориаз кожи или суставов дает ложноположительные результаты как ИФА, так и ИБ.

Еще такой вариант, когда иммуноферментный тест на ВИЧ-инфекцию показывает результат «минус» и иммунноблот также со значением «минус», здесь остается только порадоваться по причине отсутствия вируса иммунодифицита. Но при наличии специфических признаков, присущих ВИЧ-инфекции или, если человек состоит в тесном контакте с ВИЧ положительным пациентом. Тогда будет тоже необходимо провести дополнительную диагностику, например полимеразную цепную реакцию (ПЦР). К тому же при сомнительных показателях «минус» или «плюс», пациенту рекомендуется пересдать кровь через 4, а лучше 6 месяцев.

Норма и отклонение числа Т-лимфоцитов при ВИЧ-инфекции:

Норма Т-клеток от 1000 до 2900 мкл.
СПИД ранний от 500 до 200 мкл.
СПИД поздний менее 200 мкл.

Болезнь легче предотвратить, чем лечить ― это все известная мудрость. Со времен распространения в обществе свободных нравов появилось и большое количество различных венерических заболеваний. ВИЧ-инфекции и СПИД причисляются пока к неизлечимым заболеваниям. Способ передачи в основном половым путем и через кровь. На все сто процентов защититься ни от одной болезни невозможно. Существует масса непредвиденных ситуаций, даже у людей, ведущих нравственный и чистоплотный образ жизни. В ситуации повышенной опасности заражения ВИЧ и другими опасными инфекциями неоценимую пользу оказывает диагностика крови.

Вконтакте